Basis Tris 77-86-1 Penyangga Biologis Trometamol

Tris Base 77-86-1 Biologi Buffer Trometamol

Penggunaan Tris Buffer dalam Elektroforesis Protein dan Western Blotting

Tris buffer adalah bagian integral dari elektroforesis protein dan Western blotting.Semua buffer umum tersedia dicampur sebelumnya, atau, jika Anda lebih suka membuat buffer Tris Anda sendiri, Anda dapat mulai dengan bubuk Tris murni, glisin, dan bahan buffer kelas biologi molekuler lainnya.

Sebagian besar gel SDS menggunakan sistem penyangga Tris diskontinu.8Pada pH ini, ion klorida berion migrasi dengan cepat, meningkatkan pH di belakang mereka dan menciptakan gradien tegangan dengan zona konduktivitas rendah,yang menyebabkan glisin (dari buffer berjalan) untuk mengionisasi dan bermigrasi di belakang depan kloridaSebagian besar peptida dalam sampel, yang memiliki muatan negatif karena SDS terikat, bermigrasi antara klorida dan glisin, membentuk pita sempit dan dengan demikian menjadi "ditumpuk".

Setelah tumpukan mencapai gel yang larut, yang berada pada pH yang lebih tinggi (biasanya pH 8,7 8,8), peningkatan ionisasi glisin menyebabkannya mempercepat dan menyalip peptida.ukuran pori yang lebih kecil dari gel larut mulai memiliki efek penyaringan, yang menghasilkan pemisahan peptida berdasarkan ukuran.

Sebagian besar protokol blotting barat menggunakan buffer Tris dengan kekuatan ion rendah untuk transfer protein. Waktu transfer tergantung pada jenis alat blotting dan kisaran ukuran peptida yang menarik.

Penggunaan Tris Buffer dalam Elektroforesis Agarosa Asam Nukleat

Tris buffer banyak digunakan untuk elektroforesis DNA agarose. Dua buffer utama adalah TBE (Tris borat/EDTA) dan TAE (Tris asetat/EDTA).Meskipun ada beberapa perbedaan dalam resolusi dari berbagai bentuk DNA dan mobilitas mereka selama elektroforesis, buffer Tris ini umumnya dapat digunakan secara bergantian. ion borat di TBE menghambat banyak enzim, jadi tanpa melakukan beberapa jenis pemurnian DNA setelah elektroforesis,beberapa manipulasi enzim-mediated downstream mungkin tidak bekerjaOleh karena itu, TAE buffer disukai untuk penggunaan sehari-hari di sebagian besar laboratorium DNA.

Membuat Tris Buffer

Tris buffer adalah pilihan yang baik untuk sebagian besar sistem biologis karena memiliki pKa sekitar 8,1 pada suhu 25 °C, menjadikannya buffer yang efektif dalam kisaran pH 7 ̊9.Kisaran pH ini cocok untuk sebagian besar proses biologisBubuk Tris juga lebih murah dan lebih kuat daripada buffer yang lebih khusus seperti HEPES.

Ada dua cara untuk membuat larutan buffer Tris. satu adalah untuk membuat larutan basa Tris dan Tris HCl, keduanya pada konsentrasi yang diinginkan,dan kemudian tambahkan alikuot dari satu larutan (biasanya Tris HCl) ke larutan lainnya (biasanya Tris basa) sambil memantau pH sampai pH yang benar diperolehDalam prakteknya, ini sangat jarang dilakukan.

Metode biasa untuk membuat sebagian besar penyangga Tris yang umum digunakan adalah dengan hanya menggunakan basa Tris.dan kemudian buffer dibuat sampai volume yang diinginkanDengan asumsi bahwa tidak ada overshoot saat menyesuaikan pH, metode ini tidak mengubah kekuatan ion.atau menggunakan Tris HCl dan menyesuaikan pH dengan NaOH, ada perubahan kekuatan ion. Tergantung pada tujuan penggunaan buffer Tris, perubahan tersebut mungkin atau mungkin tidak penting.

Saat membuat buffer Tris, penting untuk menggunakan elektroda yang kompatibel dengan Tris saat menyesuaikan pH.Elektrod Ag/AgCl satu persimpangan dapat menunjukkan ketidakstabilan ketika digunakan dengan penyangga Tris karena perak secara bertahap merendahkan dan menyumbat elektrodaPenggunaan elektroda referensi double-junction atau calomel memastikan pengukuran pH yang akurat dalam buffer Tris.